Dithiothreitol (DTT) mangrupikeun agén réduksi anu biasa dianggo, ogé katelah aditif héjo énggal.Éta sanyawa organik molekular leutik sareng dua gugus merkaptan (-SH).Alatan sipat ngurangan sarta stabilitas, DTT loba dipaké dina biokimia jeung percobaan biologi molekular.
Peran utama DTT nyaéta pikeun ngirangan beungkeut disulfida dina protéin sareng biomolekul sanés.Beungkeut disulfida mangrupa bagian penting tina tilepan jeung stabilitas protéin, tapi dina kaayaan ékspérimén tangtu, kayaning reducible SDS-PAGE analisis, rekombinasi protéin jeung tilepan, perlu pikeun ngurangan beungkeut disulfida kana dua grup thiol mun unravel struktur spasial tina. protéinna.DTT tiasa ngaréaksikeun sareng beungkeut disulfida pikeun ngirangan kana gugus merkaptan, ku kituna muka struktur spasial protéin sareng ngagampangkeun analisa sareng ngamanipulasi.
DTT ogé bisa dipaké pikeun ngajaga aktivitas énzim jeung stabilitas.Dina sababaraha réaksi énzim-katalisis, aktivitas énzim bisa ngurangan ku oksidan.DTT tiasa ngaréaksikeun sareng oksidan pikeun ngirangan aranjeunna janten zat anu teu bahaya, ku kituna ngajagaan kagiatan sareng stabilitas énzim.
Dibandingkeun sareng agén réduksi tradisional sapertos β-mercaptoethanol (β-ME), DTT dianggap agén réduksi anu langkung aman sareng langkung stabil.Éta henteu ngan ukur stabil dina leyuran cai, tapi ogé ngajaga sipat panguranganna dina kaayaan suhu sareng asam-basa anu luhur.
Pamakéan DTT relatif basajan.Sacara umum, DTT leyur dina panyangga luyu lajeng ditambahkeun kana sistem eksperimen.Konsentrasi optimal DTT kedah ditangtukeun dumasar kana ékspérimén khusus, sareng umumna dianggo dina kisaran 0.1-1mM.Konsentrasi anu langkung handap tiasa ngirangan épék ngarugikeun kana kamekaran sél sareng tiasa ngirangan sitotoksisitas kusabab overekspresi protéin target.Konsentrasi anu langkung luhur tiasa nyababkeun beban métabolik sél anu kaleuleuwihan, mangaruhan kamekaran sél sareng efisiensi éksprési.
Cara pikeun nangtukeun konséntrasi optimal nyaéta ngévaluasi tingkat éksprési protéin udagan ku ngalaksanakeun tés induksi IPTG dina konsentrasi anu béda.Tés budaya skala leutik bisa dipigawé maké sauntuyan konsentrasi IPTG (misalna 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, jsb) jeung pangaruh éksprési dina konsentrasi béda bisa dievaluasi ku detecting tingkat ekspresi protéin target (misalna Kulon. blot atanapi deteksi fluoresensi).Numutkeun hasil ékspérimén, konsentrasi anu gaduh pangaruh éksprési anu pangsaéna dipilih salaku konsentrasi anu optimal.
Salaku tambahan, anjeun ogé tiasa ngarujuk kana literatur anu relevan atanapi pangalaman laboratorium anu sanés pikeun ngartos rentang konsentrasi IPTG anu biasa dianggo dina kaayaan ékspérimén anu sami, teras ngaoptimalkeun sareng saluyukeun dumasar kana kabutuhan ékspérimén.
Kadé dicatet yén konsentrasi optimal bisa rupa-rupa gumantung kana sistem ekspresi béda, protéin target, jeung kaayaan ékspérimén, jadi éta pangalusna pikeun ngaoptimalkeun dina dasar kasus-demi-kasus.
Kasimpulanana, DTT mangrupakeun agén pangréduksi nu ilahar dipaké pikeun ngurangan beungkeut disulfida dina protéin jeung biomolekul séjén sarta ngajaga aktivitas énzim jeung stabilitas.Geus loba dipaké dina biokimia jeung percobaan biologi molekular.
waktos pos: Sep-28-2023